V nehostinnej púštnej oblasti desať rokov po udalostiach v Raccoon City sa hlavný hrdina Chris Redfield stretáva s ďalšou nočnou morou. V tejto konfrontácii však nebude sám. V hre Resident Evil 5 sa objaví aj ženská postava z univerza Resident menom Rebecca Chambers.

Hra preberá niektoré mechaniky z predchádzajúceho štvrtého dielu, čo znamená, že sa na hru opäť pozeráte spoza pleca hlavnej postavy. Hra zaujme predovšetkým plne prepracovanými postavami s nevídanou mimikou a takmer dokonalými vlasmi. Prostredia sú tiež ešte interaktívnejšie ako predtým a mäsožraví ľudia nakazení vírusom sa na vás vrhnú v masívnom počte. S väčším náporom nebezpečenstva však prichádza aj bohatší arzenál zbraní na diaľku a špeciálnych úderov nohou a rukou na blízko.